
液相色谱根据样品组分与固定相及活动相间分拨系数分别辞别,选型需思量判辨主意、样品本质、辞别央求、检测器类型、色谱柱参数、泵本能、仪器兼容性及本钱等众方面成分。
液相色谱是基于区别物质正在固定相和活动相之间的分拨系数分别举办辞别判辨的。
- 固定相:是色谱柱内填充的物质,样品中的种种组分与固定相互相用意的才华区别。
- 活动相:带领样品通过色谱柱的液体。当活动相带领样品进入色谱柱后,区别组分正在固定相和活动相之间频频举办分拨。与固定相用意力较弱的组分先流卓绝谱柱,而与固定相用意力较强的组分后流卓绝谱柱,从而实行各组分的辞别。然后通过检测器对流出的组分举办检测,获得色谱图,依据色谱峰的保存时分和峰面积等新闻举办定性和定量判辨。
- 确定是举办定量判辨、定性判辨照旧纯度检测等。区别的判辨主意对液相色谱的本能央求有所区别。比如,定量判辨须要较高的正确性和反复性,对检测器的线性局限和安宁性央求较高;定性判辨则更珍视色谱峰的辞别度和保存时分的正确性。
- 安宁性:样品正在区别要求下的化学安宁性也是主要成分。某些样品也许对光、热、氧气或pH值敏锐,须要挑选符合的色谱要求以避免样品判辨或变质。
- 分子量巨细:对付大分子样品,也许须要挑选具有较大孔径的色谱柱,以保障样品或许就手进入固定相举办辞别;对付小分子样品,则能够挑选向例孔径的色谱柱。
- 辞别度:了了对区别组分之间辞别度的央求。假设须要辞别繁复的搀和物,就央求液相色谱具有较高的辞别才华,这平凡与色谱柱的类型、长度、粒径以及活动相的构成等成分相闭。
- 判辨时分:思量判辨时分的是非。少少敏捷判辨手段实用于对判辨速率央求较高的场地,而对付繁复样品也许须要较长的判辨时分来实行精良的辞别。
- 类型挑选:依据样品的本质和判辨主意挑选符合的检测器。常睹的检测器有紫外可睹检测器(UV-VIS)、二极管阵列检测器(DAD)、荧光检测器(FLD)、示差折光检测器(RID)、蒸发光散射检测器(ELSD)等。
- UV-VIS实用于有紫外或可睹光接收的样品,具有较高的活络度和挑选性。
- DAD能够同时检测众个波长下的信号,供应更众的光谱新闻,有助于化合物的定性判辨。
- ELSD可用于检测挥发性低于活动相的样品,对少少糖类、脂类、纠合物等的检测效益较好。
- 活络度:满意检测限的央求。对付痕量判辨,须要挑选活络度高的检测器;对付含量较高的样品,检测器的活络度央求相对较低。
- 填料类型:常睹的填料有硅胶基质和纠合物基质。硅胶基质色谱柱具有较高的柱效和辞别才华,但对活动相的pH值局限有必定束缚;纠合物基质色谱柱则可正在更宽的pH值局限内运用,实用于少少对硅胶有吸附用意的样品。
- 粒径:较小粒径的填料能够供应更高的柱效,但柱压也相对较高,对仪器的央求也更高。大凡依据辞别央求和判辨速率挑选符合的粒径,常睹的有3μm、5μm、10μm等。
- 柱长:柱长影响辞别度,柱长扩展,辞别度升高,但判辨时分也会延伸。依据实质须要挑选符合的柱长,大凡常用的柱长为150mm、250mm等。
- 流量精度:确保泵或许无误输送活动相,流量精度直接影响判辨结果的反复性。
- 压力局限:满意色谱柱所需的职责压力,区别的色谱柱和判辨要求对压力央求区别。
- 流量安宁性:正在判辨进程中,泵的流量应坚持安宁,避免显露流量震动对辞别效益发作影响。
- 确保所选的液相色谱仪与其他仪器筑设(如进样器、检测器等)兼容,或许寻常协同职责。
- 思量仪器的庇护和操作便当性,比如是否易于调动部件、是否有友谊的操作界面等。
- 包含仪器购买本钱、运转本钱(如活动相、色谱柱、检测器耗材等)以及庇护本钱等。正在满意判辨央求的条件下,归纳思量本钱成分,挑选性价比高的仪器。